蛋白质小分子偶联Protein small molecule coupling
技术平台
以TurboID技术平台为例，该技术平台在目的蛋白末端融合了突变型生物素连接酶。在过表达细胞中，加入生物素刺激，在10min之内，即可迅速对目的蛋白的相互作用蛋白进行生物素化标记。这一标记过程不仅速度快，背景低，甚至在室温条件下也能顺利进行。因此，TurboID技术平台极大地拓展了其应用范围，不仅适用于哺乳动物细胞体系，还可应用于植物、昆虫等多种生物体系。随后，通过分离富集生物素标记的蛋白质并进行酶切处理，可以轻松获得肽段样品，进而用于质谱分析，从而深入研究蛋白质的相互作用及其功能。
平台特点
√活细胞原位捕获瞬时/弱互作，避免 APEX 类酶需 H2O2引发的细胞毒性。
√标记时间仅需 10 分钟（传统 BioID 需 18～24 小时），且可在室温（25°C）下高效工作。适用于捕获瞬时/弱相互作用及低丰度蛋白，高灵敏度。
√提供高分辨率空间信息，揭示复杂生物进程。
案例展示
项目简介：分析给药处理前后，细胞中与目的蛋白（POI）相互作用蛋白组的变化。
数据展示：利用邻近标记策略，构建POI-TurboID表达载体，在细胞中过表达，分别设置给药组与空白组，生物素化标记。将细胞中蛋白组进行富集后，定性与定量分析生物素化蛋白的差异，以表征POI相互作用蛋白组的变化。
相关文献
※对细胞内蛋白质丰度、活性、相互作用和成药性进行多重分析，成功应用于约 1,600 个 BRaf 蛋白变体的多维度生化分析，揭示了癌症相关突变对蛋白功能调控的机制差异。Multiplexed profiling of intracellular protein abundance, activity, interactions and druggability with LABEL-seq.Nat Methods. 2024 Nov;21(11):2094-2106.(IF: 36.1)
※开发新型邻近标记技术，解决了传统光催化标记的痛点，实现了精准、低背景的活体兼容空间蛋白质分析。Precise and In Vivo-Compatible Spatial Proteomics via Bioluminescence-Triggered Photocatalytic Proximity Labeling. ACS Cent. Sci. doi: 10.1021/acscentsci.5c00520.(IF: 13.1)
